RT-PCR試劑盒兩種測量方法的優(yōu)缺點介紹
點擊次數：668 更新時間：2022-12-26
RT-PCR試劑盒以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩(wěn)定性。
應用雙抗體夾心法測定標本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP標記的抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。
在RT-PCR試劑盒實驗中，用直接法測定抗體，不能直接用酶符號測定抗體，然后直接加入底物。而要加酶標抗抗體呢？
如果將酶符號應用于待測抗體，直接法比經典法更復雜，在探索符號條件時，不能保證抗體因誤操作而失活;酶標二抗目前已較為常見，被規(guī)?；徺I后使用方便。如果你直接做好了，方法已經優(yōu)化了，d一抗二抗顯色，總時間加起來，結果不會超過2到3小時。
RT-PCR試劑盒可以使用直接ELISA法，即抗體包板用來在抗原上標記酶，然后顯色，這與直接方法相比，減少了一步的時間，縮短了時間。然而直接法和直接ELISA法各有優(yōu)缺點，其要求取決于實驗的具體要求。
1、要檢測的抗體通常是免疫后產生的抗體。其中有免疫功能衰竭、抗體過少等因素存在。酶符號的使用存在許多不確定因素，如在使用酶符號之前無法測量效價的可能性，這會導致不必要的混淆。
2、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)中酶聯(lián)抗體與抗體結合后，ELISA試劑盒具有很強的信號放大作用，可使信號擴增一千倍以上，適用于低抗體含量的測定。
3、直接酶標記抗體在篩選出單克隆抗體后可以考慮，但測定系統(tǒng)的建立需要大量的工作。
